Мазок отпечаток – исследование, о котором, в отличие от стандартного мазка, слышали далеко не все. Сегодня этот способ диагностики активно применяется , гинекологами, урологами, онкологами. А также некоторыми другими специалистами.
Как проводится взятие мазков отпечатков, интересуются пациенты у своих лечащих врачей.
Какие есть разновидности этого анализа?
Как правильно подготовиться к взятию отпечатка и как проводится расшифровка?
- Мазок отпечаток: особенности забора материала
Мазок отпечаток: что это за исследование
Многие пациенты часто интересуются о том, что это такое – исследование мазков отпечатков, и в чем особенности этого исследования. На самом деле исследование выполняется довольно просто. Все, что необходимо сделать – это приложить к предметному стеклу орган, который необходимо исследовать. Затем, когда отпечаток будет получен, окрашивают полученный материал специальным раствором и изучают с помощью микроскопа.
Интересно, что мазки отпечатки применяют не только для постановки диагнозов в медицинской сфере. Их широко применяют в судебно-медицинской экспертизе, микробиологии, патологической анатомии. Широко применяться подобное исследование стало только в последние годы. Да и то до сих пор далеко не все пациенты знают, что подразумевается под этим анализом.
Как правильно подготовиться к нему и какие бывают разновидности обследования.
Разновидности мазка отпечатка
Сегодня выделяют несколько вариантов забора мазка отпечатка. Пациенты спрашивают у своих врачей, какие есть разновидности исследования.
Вариантов несколько:
Исследование может быть применено, чтобы диагностировать различные инфекции на половых органах. Его выполнение рекомендуется при различных подозрениях на инфекционные процессы как специфического, так и неспецифического типа. Исследование с язвы может выполняться, например, при . При этой патологии на половом органе, особенно у мужчин появляется неприятная, болезненная язва. С нее и берется отпечаток, чтобы потом при темнопольной микроскопии обнаружить бледных трепонем.
Еще один вариант диагностики – это обнаружение заражения герпесом. Особенно он эффективен после того, как образуются эрозии после прорыва папул.
- Мазок отпечаток головки члена
Отпечаток рекомендуется выполнять мужчинам, которые страдают от неспецифических инфекций. Особенно часто его стоит проводить при баланопостите или баланите. С помощью исследования можно выявить неспецифичные патогены, такие как кокковая палочка, кишечная палочка, грибки.
- Мазок отпечаток с эрозии шейки матки
Женщинам рекомендуют сдавать анализ в том случае, если у них есть эрозия на шейке матки. Это необходимо чтобы убедиться, что в органе нет признаков злокачественного перерождения. Если такие признаки обнаруживаются, представительнице прекрасного пола рекомендуется обратиться к онкологу.
Показания к выполнению мазка отпечатка
Мазок отпечаток головки, с шейки матки или иных частей может выполняться по различным показаниям. Чаще всего врач направляет пациента на это исследование в том случае, если есть подозрение на инфекционный процесс.
Симптомы, с которыми больной может получить направление на анализ, следующие:
Всем хорошо известно, что мазок из уретры – болезненная процедура для представителей сильного пола. У женщин эта процедура проходит несколько легче, но все равно неприятна. Мазок отпечаток отличается от мазка из уретры полной безболезненностью выполнения.
Правда, к сожалению, показания для выполнения этих процедур не одинаковы, а потому заменить одну другой чаще всего нельзя.
Техника выполнения очень проста. Мужчину просят раздеться ниже пояса. Затем с помощью специальной щеточки собирают биологический материал. Особенно важно собрать достаточное количество материала, но при этом не переборщить.
Если материала будет недостаточно, нельзя будет получить хоть какие-то результаты. Избыток же биоматериала может привести к получению ложноположительных или ложноотрицательных результатов.
Полученный с помощью щеточки биологический материал наносят на предметное стекло. И закрепляют специальными методами для исследования с помощью микроскопа. Либо помещают в специальную пробирку.
Пробирку или стекло направляют в лабораторию, где проводятся дальнейшие исследования по необходимости. В качестве аналогии забора материала щеточкой можно приложить половой член к предметному стеклу или аккуратно собрать предметным стеклом выделения. Но, как считают врачи, использование щеточки – более правильный вариант.
Как готовятся мазки отпечатки
Приготовление мазка отпечатка – задача, которую должен выполнять грамотный врач или лаборант. Дело в том, что мало просто нанести биологический материал на предметное стекло. Его необходимо еще и правильно зафиксировать.
Если биоматериал не будет зафиксирован, то исследовать его с высокой степенью достоверности не удастся. Для окраски могут использоваться различные красители. Чаще всего применяют окраску по Граму. С ее помощью выявляют нормальную и патологическую микрофлору, которая может наносить пациенту вред.
Правда, стоит иметь в виду, что отпечаток не позволяет выявить вирусы, так как окрасить их невозможно. Зато с помощью этого диагностического метода можно обнаружить не только патогенные микроорганизмы, но и . Чаще всего диагностируется кандида.
Мазок отпечаток: базовые правила подготовки
Ни мужчине, ни женщине нельзя прийти на обследование и сразу получить достоверные результаты, сдав анализ просто так. Необходимо провести минимальную подготовку, которая позволит получить достоверные данные.
Если подготовка будет проводиться правильно, то результаты удастся получить наиболее точные и достоверные. Если же пациент нарушит рекомендации, велика вероятность того, что ему придется проходить диагностическое исследование повторно. Так как врач сможет поставить их достоверность под сомнение.
Расшифровка результатов мазка отпечатка
Расшифровка результатов мазка отпечатка должна проводиться врачом. Только медицинский работник сможет достоверно оценить результаты. Ориентируясь не только на то, что написано в справке, но и на то, как себя ощущает пациент. По сути, только благодаря врачу можно отделить достоверные результаты от ложноположительных и ложноотрицательных.
При оценке результатов в первую очередь обращают внимание на:
- наличие в мазке бактерий, которые могут быть как патогенными, так и нормальными;
- обнаружение в результатах патогенных грибков, которые могут негативно влиять на здоровье пациента;
- наличие эпителия, слизи и других частиц, которые могут оцениваться как положительно, так и отрицательно.
Пациентам не рекомендуется самостоятельно проводить расшифровку анализов даже в том случае, если кажется, что сделать это можно легко. Необходимо принести полученные результаты врачу. Чтобы он оценил итоги и, опираясь на них и объективные данные от исследования, мог поставить точный диагноз.
Мазок отпечаток: что делать, если результаты плохие
Если результаты мазка отпечатка оказались плохими, в первую очередь пациент не должен впадать в панику. Необходимо, посетив врача, получить от него направление на повторный анализ. При положительных результатах необходимо обязательно перепроверять итоги.
Чтобы исключить ложноположительные варианты поставки диагноза. Далее, после того как будут получены повторные результаты, если они все еще положительны, нужно обратиться к врачу.
Медицинский работник сможет:
- дать рекомендации относительно прохождения дополнительных исследований, чтобы поставить окончательный диагноз;
- дать рекомендации относительно правильного лечения заболевания;
- проконтролировать ход терапии и назначить контрольную диагностику, чтобы понять, насколько в итоге эффективно лечение;
- при необходимости поменять подход к лечению, чтобы получить надежные результаты.
Если у пациента выявлены инфекции, передающиеся половым путем, это может грозить нарушением репродуктивной функции. Именно бесплодие в основном заставляет людей обращаться к врачу для проведения диагностики. В которую, в том числе, может входить и выполнение мазка отпечатка.
Часто пациенты интересуются, где можно сдать цитологию мазка отпечатка или пройти альтернативу этому исследованию. Обратиться можно как в государственный кожно-венерологический диспансер, так и в частную клинику при необходимости. Сдать биоматериал на исследование можно на бесплатной основе. Если проходить диагностику по месту жительства по рекомендации врача. Также и платно.
Сдача мазка отпечатка – это хороший диагностический метод, позволяющий поставить диагноз во многих случаях. Если же этого подхода будет недостаточно для определения болезни, врач сможет после оценки результатов подобрать наиболее оптимальные варианты уточняющей диагностики. А затем выбрать способы терапии, которые дадут положительный эффект, а также проконтролировать ход лечения.
При необходимости сделать мазок отпечаток обращайтесь к грамотным венерологам и гинекологам.
И.П. Шабалова, Т.В.Джангирова, Н.Н.Волченко, К.К.Пугачев
Российская медицинская академия последипломного образования
Материалом для цитологической диагностики может быть:
- пунктах молочной железы;
- отпечатки с биоптата;
- соскоб с ткани молочной железы (или опухоли), удаленной во время операции;
- выделения из соска (метод практически неэффективен для диагностики злокачественных новообразований молочной железы, за исключением внутрипротокового рака);
- материал, полученный с эрозивных поверхностей.
Для диагностического заключения по цитологическим препаратам важно получение полноценного материала: он должен быть взят не из окружающих тканей, а из очага поражения. Трудности могут отмечаться при выраженном фиброзе или наличии кистозно измененных участков, в таких случаях нужно пытаться получить материал из разных участков опухоли, из стенок кисты; при некротических изменениях - стараться брать материал из периферии опухоли.
Получение материала
Пункционный материал
При проведении диагностической пункции необходимо соблюдать ряд правил:
- Игла и шприц для пункции должны быть абсолютно сухими.
- Не следует проводить анестезию пунктируемого образования в связи с тем, что сама пункция обычно не более болезненна, чем прокол иглой для анестезии, кроме того, применение новокаина может вызвать изменение клеточных элементов.
- Мандреном, как правило, не пользуются, так как иглы, применяемые для диагностических пункций, имеют очень маленький диаметр и косой срез; игла легко продвигается через ткани, расположенные над пораженным участком (кожу, подкожную клетчатку, мышцы), расслаивая их, поэтому закупорка иглы происходит очень редко.
- Нельзя пунктировать опухоль при подозрении на меланому.
- Пункцию выполняют с соблюдением правил асептики и антисептики.
Техника выполнения пункции
Пункцию проводит лечащий врач или врач клинической лабораторной диагностики в процедурном кабинете, иногда - в больничной палате (в зависимости от тяжести состояния больного). Если требуется контроль за положением иглы (опухоль небольших размеров, образование с кальцинатами и проч.), пункция выполняется под рентгенологическим контролем или под контролем ультразвукового исследования, компьютерной томографии и других методов в соответствующем кабинете.
Перед проведением пункции участок поражения тщательно пальпируют, определяют его подвижность, связь с окружающими тканями и возможность оптимальной фиксации. Опухоль фиксируют пальцами левой руки (если пунктирующий врач - правша).
Опухоль при пальпации кажется расположенной более поверхностно, чем на самом деле, поэтому угол направления иглы при аспирационной пункции не должен быть перпендикулярен к ребрам. Это особенно важно соблюдать при маленькой молочной железе, в которой опухоль может находиться близко к грудной стенке, и игла может попасть в ребро. Если игла попадет в ребро, в мазках можно обнаружить элементы костно-мозгового кроветворения (мегакариоциты, бластные клетки, миелоциты, эритробласты и проч.).
Пункцию производят тонкой иглой (наружный диаметр 0,6-0,7 мм), которая присоединяется к шприцу 10-20 мл. Иглу без шприца (или с присоединенным шприцем с опущенным поршнем) вводят через кожу в исследуемое образование под небольшим углом к грудной стенке. По достижении очага поражения осторожно пальпируют ткань вокруг введенной иглы, определяя правильность прокола; при небольшом подкожном узле можно несколько наклонить иглу, при этом опухоль на игле сместится, что ощущается пальцами и подтверждает правильное ее положение. Не рекомендуется производить вращательные движения иглой, так как это наносит лишнюю травму, не приводя к получению более полноценного материала. После этого присоединяют шприц с опущенным поршнем (если он не был присоединен сразу) и делают два-три резких насасывающих движения, снимая шприц с иглы после каждого подъема поршня. По окончании взятия шприц необходимо снять, иглу извлекать без шприца, что позволяет сохранить материал; для цитологического исследования обычно достаточно материала, попавшего в просвет иглы.
Содержимое иглы выдувается на предметное стекло (или в контейнер со специальным консервирующим раствором для жидкостной цитологии) при помощи шприца, который наполняется воздухом и вновь соединяется с иглой. Материал распределяется по стеклу краем шлифованного стекла или ребром иглы (см. ниже раздел "Приготовление препаратов").
Если при проколе опухоли появляется жидкость, то под иглу подставляют пробирку и собирают жидкость. Если она не стекает, можно использовать шприц, осторожно оттягивая поршень и набирая жидкость в шприц, после чего шприц снимают и его содержимое сливают в пробирку. После удаления всей жидкости и помещения ее в пробирку (с добавлением нескольких кристаллов цитрата натрия) обязательно следует тщательно пальпировать участок, из которого была удалена жидкость, для исключения остаточных масс, которые могли быть скрыты кистозным содержимым. Необходимо дополнительно пунктировать стенку кисты и приготовить мазки из этого материала.
Если при пункции получена жидкость, вся она должна быть доставлена в лабораторию.
Биопсийный материал
Цитологические препараты можно делать из материала, полученного при биопсии (столбика ткани):
- отпечатки выполняются путем аккуратного перемещения биоптата иглой по стеклу; при этом нужно стараться не травмировать биопсированный кусочек.
Операционный материал
Разрез уплотнения, опухоли или лимфатического узла необходимо проводить сухим скальпелем, чтобы избежать разрушения клеток водой.
- Операционный материал получают, прикладывая стекло к разрезу удаленной опухоли или другого участка поражения.
- Если консистенция ткани плотная, что не позволяет сделать отпечатки, производят соскоб с поверхности свежего разреза опухоли (путем легкого соскабливания скальпелем или краем предметного стекла с последующим приготовлением препарата)
Отделяемое из молочной железы
Для приготовления препарата капля отделяемого из молочной железы наносится на стекло и готовится мазок.
Если отделяемого немного, для получения мазков необходимо сцеживающими движениями, надавливая большим и указательным пальцами в области околососковой зоны, получить капли выделений из соска.
Мазки-отпечатки с эрозированных поверхностей
К месту поражения прикладывается предметное стекло, на котором остается некоторое количество клеточных элементов и отделяемого.
Материал можно брать также с помощью ватного тампона и наносить на предметное стекло в виде отпечатков.
Маркировка, доставка и обработка материала в цитологической лаборатории
Цитологический материал доставляют в лабораторию в ближайшие сроки после его получения. Особенно это относится к содержимому кист и любому кровянистому материалу.
Для доставки необходимо иметь специальные контейнеры для предметных стекол, пробирки. Не допускается контакт нативного материала, в том числе подсушенного предметного стекла, с бланком-направлением.
Полученный материал доставляют в лабораторию с бланком-направлением, в котором должны быть представлены паспортные данные обследуемой пациентки, диагноз, проведенное лечение, точно должна быть указана локализация участка, откуда был взят материал, и способ его получения.
Лаборант, который принимает материал, должен проверить маркировку препаратов, пробирок и т. д., оформление направления, отметить характер и количество биоматериала, число присланных мазков.
Приготовление препаратов
Правила приготовления препаратов едины вне зависимости от того, делается мазок специалистом, получившим материал, или готовится в лаборатории.
Стекла для препаратов нужно использовать новые, стандартного размера, чистые, обезжиренные и сухие.
Хороший мазок должен быть максимально тонким (максимально приближающимся к однослойному), равномерной толщины (не волнообразным) на всем протяжении. Материал распределяется по стеклу краем шлифованного стекла или ребром иглы.
Мазок должен начинаться на 1 см от узкого края предметного стекла и заканчиваться примерно в 1,5 см от другого края; мазок не должен достигать широкого края стекла, между мазком и широким краем предметного стекла должно оставаться расстояние не менее 0,3 см.
Жидкости, полученные при пункции, тут же центрифугируют, сливают верхний слой центрифугата, а из осадка делают мазки с помощью специального шлифованного стекла или пластинки (методика приготовления препаратов аналогична мазкам крови). При этом получаются тонкие препараты со щеточкой по краю для цитологического исследования.
Жидкостная цитология
- Лучшим способом обработки материала для цитологического исследования является жидкостная цитология. Препараты, приготовленные на цитоцентрифуге, однослойные, материал распределен равномерно на определенной поверхности.
- Препараты удобно просматривать, так как материал распределен равномерно.
- При необходимости проведения иммуноци-тохимических исследований экономятся дорогостоящие реактивы, результаты удобно интерпретировать
Фиксация и окрашивание препаратов
Наши преимущества:
- Недорого прием врача от 900 рублей
- Срочно анализы в день обращения от 20 минут до 1 дня
- Близко 5 минут от метро Варшавская и Чистые пруды
- Удобно работаем каждый день с 9 до 21 каждый день (включая праздники)
- Анонимно!
Все привыкли, что при обследовании мужчины у венеролога и уролога на инфекции, передающиеся половым путем, берут мазок из уретры и анализ крови на ИППП. Но бывает, что ведущую роль в диагностике играют и другие способы забора материала для исследования.
К таким методам относится мазок-отпечаток с головки и кожи крайней плоти полового члена мужчины.
Воспалительный процесс не всегда имеется в мочеиспускательном канале, и инфекция соответственно попадает и размножается не только в нем. При различных видах бактериальных и грибковых баланопоститов, генитальном герпесе, сифилисе, фимозе, папилломо-вирусной инфекции патологический процесс мы наблюдаем именно на коже полового члена и его головке.
Соответственно, закономернее будет взять мазки и соскобы непосредственно с очага поражения, а потом уже исследовать кровь и уретру.
Техника забора материала при анализе мазка-отпечатка достаточно проста. Существует 4 вида диагностики, при которой применяется этот метод:
- Чистое предметное стекло просто прикладывается к воспаленному участку на коже члена. И при помощи небольшого скользящего движения происходит нанесение поверхностных слоев эпителия с имеющимися в нем возбудителями ИППП на стекло. Далее препарат высушивается, красится и микроскопируется. Так можно определить количество лейкоцитов, слизи, эпителия, грибов и бактерий с головки полового члена. Причем делается этот мазок-отпечаток достаточно быстро. Через полчаса ответ готов.
- При помощи урогенитального зонда с поверхности головки, крайней плоти, с каких-то высыпаний и язвочек делается соскоб более глубоких слоев эпителия и помещается в пробирку эпендорф для проведения ПЦР анализа. Так определяют герпесы, сифилис, ВПЧ, кандиду, гарднереллу и других возбудителей венерических заболеваний кожи головки и крайней плоти полового члена мужчины.
- Если же ватной стерильной палочкой снять налет или слизь с головки и поместить материал в транспортную или питательную среду, то можно провести посев на флору и чувствительность к антибиотикам той микрофлоры, которая вызвала воспаление кожи члена.
- При наличии долго незаживающих язвочек, эрозий, пятен и подозрении на злокачественный процесс берется соскоб на атипичные клетки - цитологическое исследование.
Анализ мазка-отпечатка, наверное, самый безболезненный метод исследования мужской половой системы. Поэтому нет причин затягивать с обращением к врачу урологу и венерологу для сдачи этого анализа при появлении каких-то пятен и других патологических высыпаний на коже головки и крайней плоти полового члена.
Стоимость этого вида мазка - 900 рублей. Работает экспресс-лаборатория ежедневно. По результатам анализа Вас обязательно проконсультирует специалист по мужским болезням и ИППП.
Мазок-отпечаток
препарат для микроскопии, приготовленный путем прикосновения предметным стеклом к исследуемой ткани или органу с последующим высушиванием, фиксацией и окраской.
1. Малая медицинская энциклопедия. - М.: Медицинская энциклопедия. 1991-96 гг. 2. Первая медицинская помощь. - М.: Большая Российская Энциклопедия. 1994 г. 3. Энциклопедический словарь медицинских терминов. - М.: Советская энциклопедия. - 1982-1984 гг .
Смотреть что такое "Мазок-отпечаток" в других словарях:
Микроскоп препарат (см. Препараты микроскопические), к рый готовят из тканей или реже из бактер роста на плотных средах Для этого из органа вырезают кусочек ткани и ее срезом один или несколько раз прикасаются (!) к предметному стеклу, мазок… … Словарь микробиологии
Препарат для микроскопии, приготовленный путем прикосновения предметным стеклом к исследуемой ткани или органу с последующим высушиванием, фиксацией и окраской … Большой медицинский словарь
Мазок Папаниколау, тест Папаниколау или цитологический мазок (англ. Papanicolaou test, Pap test или Pap smear) тест, с помощью которого можно определить предраковые или раковые клетки во влагалище и шейке матки (см. Злокачественные… … Википедия
Искусственное введение животным лабораторным (см.) иссл. к ры микроорганизмов, токсинов, иссл. материала, в к ром предполагается содержание микробов или их токсинов. В микробиологии З. э. применяют с целью воспроизвести заболевание или его… … Словарь микробиологии
- (гистологическое cytus клетка + греч. logos учение) основано на изучении с помощью микроскопа особенностей строения клеток, клеточного состава органов тканей, жидкостей организма человека и животных в норме и при патологических процессах. Ц. и.… … Медицинская энциклопедия
- (от др. греч. βίος жизнь и ὄψις внешний вид) метод исследования, при котором проводится прижизненный забор клеток или тканей из организма с диагностической целью. Биопсия является обязательным методом подтверждения диагноза при… … Википедия
Биопсия (от Греческого «βίος» жизнь и «όψη» смотрю/внешний вид) это метод исследования, при котором проводится прижизненный забор клеток или тканей из организма и последующее их микроскопическое исследование. Биопсия является обязательным… … Википедия
См. знак, малость, следствие и след простыл, напасть на след, нет следа... Словарь русских синонимов и сходных по смыслу выражений. под. ред. Н. Абрамова, М.: Русские словари, 1999. след отметина, отпечаток, оттиск; отпечаток, печать, отблеск,… … Словарь синонимов
Совокупность способов обнаружения и изучения морфологических и тинкториальных св в бактерий (микробов) в лабораторной к ре, патологическом материале или в пробах из внешней среды с помощью микроскопии. Применяют для установления д за инфекц.… … Словарь микробиологии
Список эпизодов телесериала «Декстер», рассказывающего о вымышленном серийном убийце Декстере Моргане, который работает судебным экспертом по брызгам крови в полиции Майами. Первые шесть сезонов сериала насчитывают 72 эпизода. В России показ… … Википедия
Слово отсебятина в современном русском языке очень употребительно. Оно носит стилистический отпечаток разговорной речи. Его основное значение можно определить так: ни на чем, кроме собственных измышлений, собственной прихоти, не основанное… … История слов
Приготовление окрашенного препарата состоит из следующих этапов:
1) приготовление мазков;
2) высушивание мазка;
3) фиксация мазка;
окраска мазка.
Для приготовления препарата, на обезжиренное предметное стекло, наносят каплю воды или физиологического раствора, в которую петлей вносят исследуемый материал и распределяют тонким равномерным слоем по стеклу на площади приблизительно 1 см 2 . Если исследуемый материал находится в жидкой среде, то его непосредственно наносят петлей на предметное стекло и готовят мазок. Мазки высушивают на воздухе или в струе теплого воздуха над пламенем спиртовки, не давая капле закипать.
Для фиксации мазка предметное стекло (мазком вверх) медленно проводят 3-4 раза через пламя спиртовки. Микроорганизмы при фиксации погибают, плотно прикрепляются к поверхности стекла и не смываются при дальнейшей обработке. Более длительное нагревание может вызвать деформацию клеточных структур.
При фиксации с помощью химических веществ используют хромовые соединения, формалин, осмиевую кислоту, ацетон. Один из распространенных приемов фиксации - обработка препарата метиловым или этиловым спиртом, или смесью Никифорова (равные объемы этилового спирта и эфира). При этом препарат погружают на 5-20 мин. в фиксирующую жидкость.
Методы окраски мазков и красители, используемые в микробиологии.
Существуют простые и сложные методы окраски . При простой окраске используют какой-либо один из красителей, например, фуксин водный (1-2 мин.), метиленовый синий (3-5 мин.). При окрашивании мазка препарат помещают на препаратодержатель. На мазок наносят несколько капель красителя. После истечения времени окрашивания препарат промывают водой, фильтровальной бумагой удаляют излишки воды, высушивают на воздухе и микроскопируют.
При сложной окраске последовательно наносятся на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать одни виды микроорганизмов от других. Таковы методы окраски по Грамму, по Цилю-Нильсену, окраска спор по методу Ожешки.
Красители, у которых при диссоциации выделяются водородные ионы, придающие красителю кислый характер, называются кислыми. Они окрашивают (в виде аниона) вещества основной природы. Красители, у которых при диссоциации выделяются гидроксильные ионы, - основными.
В микробиологической практике кислые и основные красители используются в виде солей, так как они способны вступать в реакцию с кислотами и основаниями. Основные красители чаще применяются в виде солей соляной, реже уксусной и серной кислот; кислые красители – в виде натриевых или калийных солей.
Красители основной природы
Красные Фиолетовые
нейтральный красный генциан фиолетовый
пиронин кристаллический фиолетовый
сафранин метиловый фиолетовый
фуксин метиловый зеленый
гематоксилин малахитовый зеленый
Синие Коричневые
Виктория везивин
метиленовый синий хризоидин.
Зеленые Черный
янус зеленый индулин
Красители кислой природы
Красные и розовые Черные Желтые
кислый фуксин нигрозин конго
эритрозин пикриновая кислота
флюоресцин
Интенсивность окрашивающей способности красителя завистит от рН среды: основные красители окрашивают объект тем интенсивнее, чем более щелочная среда, кислые – чем более кислая.
Красители можно разделить на: позитивные и негативные. Позитивные красители окрашивают непосредственно клетки микроорганизмов. Они окрашивают клетки при комнатной температуре в течение 30-60 секунд. Негативные красители окрашивают пространство, окружающее клетки микроорганизмов. В результате клетки выглядят силуэтами на фоне красителя.
Простой метод окраски
На приготовленный и фиксированный мазок нанести несколько капель водного раствора фуксина. Окрашивать 1-2 мин. Смыть краску водой, промокнуть препарат фильтровальной бумагой, досушить на воздухе и микроскопировать.
Окраска по методу Грама.
На фиксированный мазок нанести карболово – спиртовый раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1 –2 мин бумагу снять, а краситель слить.
Нанести раствор Люголя на 1 –2 мин.
Обесцветить этиловым спиртом в течение 30 –60с до прекращения отхождения фиолетовых структур красителя.
Промыть водой.
5. Докрасить водным раствором фуксина в течение 1- 2 мин., промыть водой, высушить фильторовальной бумагой и на воздухе, и микроскопировать.
Грамположительные бактерии окрашиваются в темно – фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный.
Отношение бактерий к окраске по Граму определяется их способностью удерживать образовавшиеся в процессе окраски комплекс генцианового фиолетового с йодом. Это зависит от различий в химическом составе и проницаемости клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий пептидогликан многослоен, с ним связаны тейхоевые кислоты.
У грамотрицательных бактерий пептидогликан однослоен, имеется наружная мембрана, в состав которой входят фосфолипиды, липопротеиды, белки и сложный мепополисахарид (ЛПС). Всю наружную мембрану пронизывают белки – порины, обеспечивающие диффузию различных соединений. Таким образом, у граммположительных бактерий создаются оптимальные условия для прочной фиксации красителя и резистентности к обесцвечиванию спиртом.
К грамположительным бактериям относятся старилококки, стрептококки, коринебактерии дифтерии, микобактерии туберкулеза и др., к грамотрицательным – гонококки, менингококки, кишечная палочка и др. Некоторые виды бактерии могут окрашиваться по Грамму вариабельно, в зависимости от возраста, особенностей культивирования и других факторов, воздействующих на структуру клеточной стенки. Поэтому для окраски нужно брать всегда молодые, 1- суточные культуры.
Основная ошибка, допускаемая при окраске по Грамму, состоит в “переобесцвечивании” мазка этиловым спиртом. Грамположительные бактерии при этом могут утрачивать первоначальную окраску генциановым фиолетовым и приобретать красный цвет (характерный для грамотрицательных бактерий) в результате последующей докраски мазка фуксином грамотрицательные бактерии в свою очередь могут сохранять сине–фиолетовый цвет генцианового фиолетового. Для правильной окраски следует строго соблюдать технику обесцвечивания.
